生物安全實(shí)驗室自查報告集錦
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生物安全實(shí)驗室自查報告集錦1
一、實(shí)驗目的:
1、掌握顯示細胞中過(guò)氧化物酶反應的原理和方法。2。了解細胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細胞的形態(tài)學(xué)檢測方法
二、實(shí)驗原理:
1、細胞內的過(guò)氧化物酶能把許多胺類(lèi)氧化為有色化合物,用聯(lián)苯胺處理標本,細胞內的過(guò)氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍色的聯(lián)苯胺藍,進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物,因而可以根據顏色反應來(lái)判定過(guò)氧化物酶的.有無(wú)或多少。中間產(chǎn)物藍色聯(lián)苯胺是不穩定的,無(wú)需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結束其生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過(guò)程。
3、凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周?chē)ㄟ吘壔;細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體;根據細胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀(guān)察是檢測細胞凋亡的一種直觀(guān)、可靠的方法。
三、實(shí)驗步驟:
細胞中過(guò)氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;
2、取骨髓細胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開(kāi)股骨一端,用牙簽尖的一端插入剪開(kāi)的小孔中,摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上;
3、涂片:用另一玻片將骨髓細胞沿一個(gè)方向涂布推開(kāi),室溫晾干;
4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿(mǎn)涂片為宜,處理30秒—1分鐘。
5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應6分鐘(以蓋滿(mǎn)涂片為宜)
6、清水沖洗,番紅復染2min。
7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀(guān)察,后換高倍鏡下觀(guān)察(油鏡100×)
細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀(guān)察吉姆薩染色:
1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察。
吖啶橙染色:
1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、選用藍光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀(guān)察。
四、結果與分析:
1、根據隨機選擇的幾個(gè)視野的統計,該樣品的細胞凋亡率=227/506×100=44.9
2、Hela細胞凋亡過(guò)程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化(吖啶橙染色)
五、思考題:
1、細胞凋亡的調控機制
細胞凋亡是一個(gè)受基因調控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動(dòng)自殺過(guò)程,其觸發(fā)因素多種多樣,包括細胞內誘導因子和抑制因子對細胞凋亡的調控。
2、細胞凋亡的特征
凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周?chē)ㄟ吘壔;細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細胞凋亡的方法
定性的研究方法:常規瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場(chǎng)倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀(guān)察(普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)
定量或半定量的研究方法:各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
生物安全實(shí)驗室自查報告集錦2
為深入實(shí)施《病原微生物實(shí)驗室生物安全條例》,進(jìn)一步規范我院實(shí)驗室生物安全管理,根據上級安排,對我院實(shí)驗室生物安全管理進(jìn)行自查,情況如下:
一、實(shí)驗室資質(zhì)和備案情況
醫院檢驗科已于20xx年x月向衛計委申請BSL2實(shí)驗室備案,實(shí)驗室資質(zhì)已于20xx年x月通過(guò)邢臺市臨檢中心現場(chǎng)評審。
二、實(shí)驗室生物安全組織機構、管理體系及各項規章制度的運行情況
我院已成立生物安全委員會(huì )及工作領(lǐng)導小組,委員會(huì )明確了職責,建立了工作制度,檢驗科在此基礎上建立實(shí)驗室安保制度,并定期對有關(guān)生物安全各項規章制度的運行情況進(jìn)行檢查,對存在的問(wèn)題及時(shí)進(jìn)行整改。實(shí)驗室所從事的實(shí)驗活動(dòng)均嚴格遵守有關(guān)的國家標準和實(shí)驗室技術(shù)規范、操作規程,并指定專(zhuān)人監督檢查實(shí)驗室技術(shù)規范和操作規程的落實(shí)情況。同同時(shí),對檢查情況進(jìn)行詳細記錄,定期召開(kāi)會(huì )議討論工作中發(fā)現的問(wèn)題,及時(shí)糾正。
三、人員培訓與管理
目前檢驗科共有工作人員4名,全部為專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員,三名均獲得檢驗專(zhuān)業(yè)資格資質(zhì),并建有實(shí)驗室工作人員健康檔案,所有實(shí)驗室的活動(dòng)均符合有關(guān)國家標準、技術(shù)規范和操作規程,非實(shí)驗有關(guān)物品不得進(jìn)入實(shí)驗室,實(shí)驗操作人員防護水平符合相關(guān)規定。
四、實(shí)驗室環(huán)境、設施及設備
實(shí)驗室入口處張貼有生物安全危害標識,走廊設置緊急撤離路線(xiàn)標識,實(shí)驗室內整潔無(wú)與實(shí)驗無(wú)關(guān)物品,實(shí)驗室內各消毒用品均在有效期內,實(shí)驗室內設有洗手池及洗眼裝置。各儀器運行狀態(tài)正常,均有相關(guān)操作及維護程序,實(shí)驗室內配備1臺生物安全柜,放置位置合理,使用規范,均已定期更換濾網(wǎng)并委托專(zhuān)業(yè)機構進(jìn)行檢測,檢測結果合格。
五、實(shí)驗室記錄和檔案
目前實(shí)驗室尚未通過(guò)生物安全審批,但已申請備案,病原微生物實(shí)驗室活動(dòng)均有記錄,樣本保存及銷(xiāo)毀均有記錄,消毒液配制及使用均有記錄,實(shí)驗室備有緊急安全防護裝備(隔離衣、防護服、護目鏡、N95口罩、橡膠手套)定期檢查,均在效期,實(shí)驗室各設備均有使用維護記錄,操作人員已通過(guò)考核。
六、實(shí)驗室應急預案
實(shí)驗室有針對相關(guān)意外事故的緊急預案,工作人員能熟練掌握并及時(shí)處理。
七、防護
有專(zhuān)門(mén)人員承擔院感控制工作,實(shí)驗室人員每年有體檢,并有健康檔案,個(gè)人防護用品充足。
八、菌(毒)種和樣本的儲藏與管理
目前本實(shí)驗室不保存病原微生物菌(毒)種病原微生物,樣本管理嚴格登記制度,樣本在離開(kāi)實(shí)驗室前均進(jìn)行高壓滅菌銷(xiāo)毀時(shí)做好銷(xiāo)毀登記。
九、實(shí)驗室廢棄物管理
按照《醫療廢物分類(lèi)目錄》對醫療廢物進(jìn)行分類(lèi)收集、包裝物、容器符合標準,警示物品醒目,不存在醫療廢物混入生活垃圾的'情況,使用后的一次性醫療器械按照感染性廢物進(jìn)行銷(xiāo)毀、消毒管理,醫療廢物轉運交接完整。從業(yè)人員每年進(jìn)行相關(guān)培訓,并配備必要防護用品,實(shí)驗室要對樣本進(jìn)行高壓滅菌并記錄欠完整,實(shí)驗室臺面消毒沒(méi)有登記。
整改具體措施
1、管理者及工作人員對生物安全的認識和管理水平尚不夠高,在思想上、管理制度上準備不充分,對于個(gè)人防護及環(huán)境生物污染的意識不強,從而導致條例、法規、制度的不完善,管理力度不足。所以要進(jìn)一步完善各種規章制度,加強管理力度。
2、多年來(lái)實(shí)驗室工作人員大多數專(zhuān)業(yè)人員只偏向于檢驗專(zhuān)業(yè)技術(shù)的提高,未系統學(xué)習生物安全方面的知識,對預防微生物污染的意識不強,缺乏具體的技術(shù)操作規范。所以,加強生物安全方面的知識的培訓,對全科工作人員進(jìn)行生物安全知識考試。
3、建立了實(shí)驗室臺面消毒登記本。完善了高壓鍋消毒登記,加強了生物安全的管理。
通過(guò)這次對微生物實(shí)驗室生物安全管理工作自查,提高提高了全體檢驗人員對微生物實(shí)驗室生物安全管理工作重要性的認識,加強管理,采取有效整改措施,確保實(shí)驗室工作安全
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